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天然小鼠補(bǔ)體C1q蛋白
更新時(shí)間:2026-01-12
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一、產(chǎn)品描述
1.本產(chǎn)品為Bovogen品牌旗下核心純化蛋白產(chǎn)品,正式品名為牛血清白蛋白V(又稱第五組分),貨號(hào)為BSAS1.0,英文名是BovoStar Bovine Serum Albumin(Fraction V)。品牌Bovogen成立于2001年,是ANZCO Foods Healthcare的分支機(jī)構(gòu),后經(jīng)整合成為由ANZCO Foods與Itoham Yonekyu聯(lián)合管理的生物制品供應(yīng)商,專注于高質(zhì)量動(dòng)物血清、純化蛋白及生物技術(shù)產(chǎn)品的研發(fā)與生產(chǎn),產(chǎn)品銷往超過45個(gè)國(guó)家和地區(qū)。
2.本產(chǎn)品原料源自100%澳大利亞或新西蘭原產(chǎn)的健康牛血漿,所有供體牛只均經(jīng)過政府獸醫(yī)監(jiān)管部門的宰前及宰后嚴(yán)格檢疫,符合人類食用標(biāo)準(zhǔn),從源頭確保原料的安全性與可靠性。生產(chǎn)過程嚴(yán)格遵循GMP(良好生產(chǎn)規(guī)范)要求,在澳大利亞墨爾本的現(xiàn)代化生產(chǎn)基地完成,采用兩步純化及熱激工藝,全程通過一次性無(wú)菌閉環(huán)操作系統(tǒng)進(jìn)行,避免批次交叉污染。
3.產(chǎn)品形態(tài)為白色凍干粉,無(wú)異味,易溶于水及常用緩沖液。核心技術(shù)參數(shù)如下:分子量約為66.5kDa,由581個(gè)氨基酸殘基組成,含35個(gè)半胱氨酸并形成17個(gè)二硫鍵,肽鏈第34位存在一個(gè)自由巰基;等電點(diǎn)為4.8,含氮量16%,含糖量0.08%,含脂量?jī)H0.2%,僅含已糖和已糖胺;純度不低于99%,無(wú)DNase、RNase及Protease污染,內(nèi)毒素含量控制在極低水平,滿足高靈敏度實(shí)驗(yàn)需求。
4.產(chǎn)品規(guī)格提供多檔位選擇,包括100g/瓶、500g/瓶及1kg/瓶,均為無(wú)菌包裝,每批產(chǎn)品均附帶完整的分析證書(COA),出口訂單可提供原產(chǎn)地證書,實(shí)現(xiàn)從牧場(chǎng)到成品的全程溯源。本產(chǎn)品已通過歐洲藥品質(zhì)量管理局(EDQM)認(rèn)證,證書編號(hào)為CEP 2005-293-00 Rev,符合國(guó)際生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究、體外診斷、疫苗生產(chǎn)、生物制藥等多個(gè)領(lǐng)域。

二、產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 原料優(yōu)質(zhì)且可追溯
原料血漿采集自經(jīng)USDA認(rèn)可或政府監(jiān)管的注冊(cè)出口屠宰場(chǎng),僅選用澳大利亞或新西蘭健康牛只,所有供體動(dòng)物均經(jīng)過嚴(yán)格的疫病篩查,確保無(wú)牛源性病毒污染。依托供應(yīng)鏈管理系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)從牧場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、血漿收集到生產(chǎn)加工的全程記錄追溯,明確原產(chǎn)地信息,為實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性提供源頭保障。
2. 高純度與高安全性
采用純化工藝,產(chǎn)品純度穩(wěn)定在99%以上,有效去除血漿中的雜蛋白、核酸酶、蛋白酶等污染物,避免對(duì)實(shí)驗(yàn)體系造成干擾。通過嚴(yán)格的內(nèi)毒素檢測(cè),確保產(chǎn)品內(nèi)毒素含量符合低內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn),降低對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)等敏感實(shí)驗(yàn)的毒性影響;同時(shí)產(chǎn)品不含防腐劑、穩(wěn)定劑等添加劑,保留天然蛋白活性。
3. 批次穩(wěn)定性優(yōu)秀
生產(chǎn)過程采用標(biāo)準(zhǔn)化操作流程,從原料篩選、純化、檢測(cè)到包裝均建立嚴(yán)格的質(zhì)量控制體系,每批產(chǎn)品均需通過第三方認(rèn)可實(shí)驗(yàn)室的多項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)(包括純度、活性、污染物殘留等)。長(zhǎng)期生產(chǎn)數(shù)據(jù)顯示,不同批次產(chǎn)品的關(guān)鍵性能參數(shù)變異系數(shù)小,能有效保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性與可比性,適用于長(zhǎng)期系列實(shí)驗(yàn)及規(guī)模化生產(chǎn)應(yīng)用。
4. 功能全面且適用性廣
產(chǎn)品兼具維持滲透壓、PH緩沖、載體運(yùn)輸、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充及生物分子穩(wěn)定等多重功能,可適配細(xì)胞培養(yǎng)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、藥物研發(fā)等多個(gè)領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)需求。無(wú)論是作為蛋白標(biāo)準(zhǔn)品、免疫實(shí)驗(yàn)封閉劑,還是細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑、酶反應(yīng)穩(wěn)定劑,均能發(fā)揮穩(wěn)定可靠的作用,兼容多種實(shí)驗(yàn)體系與操作流程。
5. 合規(guī)性與品質(zhì)保障
產(chǎn)品符合歐洲理事會(huì)優(yōu)質(zhì)藥品(EDQM)標(biāo)準(zhǔn),生產(chǎn)設(shè)施及工藝滿足FDA 21 CFR 211.72規(guī)范要求,過濾材料均為FDA認(rèn)證的食品接觸級(jí)材料,符合USP生物安全性標(biāo)準(zhǔn)。所有產(chǎn)品均經(jīng)過嚴(yán)格的無(wú)菌檢測(cè),無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體等微生物污染,為科研及生產(chǎn)活動(dòng)提供合規(guī)、安全的物料支持。
三、儲(chǔ)存條件
1. 未溶解產(chǎn)品儲(chǔ)存
未開封的凍干粉產(chǎn)品應(yīng)儲(chǔ)存在2-8℃的陰涼干燥環(huán)境中,避免陽(yáng)光直射、高溫及潮濕。儲(chǔ)存期間需保持包裝密封完好,防止吸潮結(jié)塊。產(chǎn)品常溫運(yùn)輸條件下穩(wěn)定性良好,運(yùn)輸過程中需避免劇烈震蕩與異常溫度(低于0℃或高于30℃)。
2. 保質(zhì)期說明
在規(guī)定儲(chǔ)存條件下,未開封產(chǎn)品的保質(zhì)期為自生產(chǎn)當(dāng)月起3年,具體有效期詳見產(chǎn)品外包裝盒及分析證書(COA)。超過保質(zhì)期的產(chǎn)品請(qǐng)勿使用,以免因蛋白活性下降或性能變化影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
3. 溶解后產(chǎn)品儲(chǔ)存
產(chǎn)品溶解后,建議立即使用以保證性能。若需短期保存,可將溶解后的溶液分裝至無(wú)菌容器中,在4℃條件下密封保存,保存時(shí)間不超過7天;若需長(zhǎng)期保存,應(yīng)將溶解后的溶液分裝為單次使用量,置于-20℃或-80℃冷凍儲(chǔ)存,可保存6個(gè)月。
4. 儲(chǔ)存注意事項(xiàng)
冷凍儲(chǔ)存的溶解液需避免反復(fù)凍融(建議不超過3次),反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致蛋白構(gòu)象改變、活性下降,還可能引起蛋白聚集沉淀。儲(chǔ)存過程中應(yīng)避免與揮發(fā)性化學(xué)品、強(qiáng)氧化劑等有害物質(zhì)混放,防止污染。若儲(chǔ)存期間發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品出現(xiàn)異常顏色變化、異味或明顯結(jié)塊,應(yīng)停止使用。
四、工作原理
牛血清白蛋白(BSA)作為牛血漿中的主要蛋白質(zhì)成分,其核心功能基于其獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì),在不同實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景中通過多重機(jī)制發(fā)揮作用:
1. 維持滲透壓與PH緩沖作用
BSA分子量大且具有一定的親水性,在水溶液中能形成穩(wěn)定的膠體體系,可有效維持溶液的滲透壓平衡,這一特性在細(xì)胞培養(yǎng)中尤為重要,能避免細(xì)胞因滲透壓變化導(dǎo)致的吸水破裂或失水皺縮。同時(shí),BSA分子中含有的氨基酸殘基可通過質(zhì)子化與去質(zhì)子化反應(yīng)調(diào)節(jié)溶液PH值,發(fā)揮溫和的緩沖作用,為細(xì)胞生長(zhǎng)或酶促反應(yīng)提供穩(wěn)定的酸堿環(huán)境。
2. 載體運(yùn)輸作用
BSA分子結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)疏水結(jié)合位點(diǎn),能夠與多種小分子物質(zhì)特異性結(jié)合,包括脂肪酸、激素、類固醇、金屬離子及部分藥物分子等。在細(xì)胞培養(yǎng)體系中,BSA可作為載體將難溶性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(如脂肪酸)運(yùn)輸至細(xì)胞內(nèi),促進(jìn)細(xì)胞吸收利用;在體外診斷或藥物研發(fā)中,可通過載體作用提高疏水性物質(zhì)的溶解性與穩(wěn)定性,優(yōu)化反應(yīng)體系。
3. 營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充作用
BSA富含多種必需氨基酸,在細(xì)胞培養(yǎng)(尤其是無(wú)血清培養(yǎng))中可作為營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑,為細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖提供必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),支持細(xì)胞代謝活動(dòng)。對(duì)于生長(zhǎng)周期較長(zhǎng)或營(yíng)養(yǎng)需求較高的細(xì)胞(如原代細(xì)胞、干細(xì)胞),BSA的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充作用能顯著提高細(xì)胞存活率與增殖效率。
4. 生物分子穩(wěn)定作用
BSA能與酶、抗體、核酸等生物分子通過非特異性相互作用形成復(fù)合物,減少這些生物分子在儲(chǔ)存或反應(yīng)過程中的構(gòu)象變化,防止其因氧化、吸附于容器壁或降解而失活。在PCR反應(yīng)中,BSA可穩(wěn)定DNA聚合酶的活性,減少抑制物對(duì)酶促反應(yīng)的干擾;在抗體儲(chǔ)存液中添加BSA,能延長(zhǎng)抗體的保質(zhì)期并維持其結(jié)合活性。
5. 封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)作用
在免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)(如ELISA、Western Blot、免疫熒光)中,實(shí)驗(yàn)載體(如酶標(biāo)板、硝酸纖維素膜)表面存在大量非特異性結(jié)合位點(diǎn),易導(dǎo)致抗體等試劑非特異性吸附,產(chǎn)生高背景信號(hào)。BSA作為單一成分的惰性蛋白,可競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合這些非特異性位點(diǎn),形成致密的封閉層,阻止抗體與載體的非特異性結(jié)合,從而提高實(shí)驗(yàn)的特異性與靈敏度。
五、解決實(shí)驗(yàn)中哪些問題
本產(chǎn)品憑借其高純度、低污染、批次穩(wěn)定等核心特性,可針對(duì)性解決生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)中多個(gè)常見痛點(diǎn)問題:
1. 解決實(shí)驗(yàn)背景信號(hào)過高問題
在ELISA、Western Blot等免疫實(shí)驗(yàn)中,非特異性結(jié)合是導(dǎo)致背景信號(hào)過高的主要原因之一。本產(chǎn)品純度不低于99%,不含雜蛋白、核酸酶等污染物,作為封閉劑使用時(shí),能高效占據(jù)載體表面的非特異性位點(diǎn),避免抗體的非特異性吸附,顯著降低實(shí)驗(yàn)背景,使目標(biāo)信號(hào)更清晰,提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
2. 解決細(xì)胞培養(yǎng)中細(xì)胞生長(zhǎng)不良問題
細(xì)胞培養(yǎng)(尤其是無(wú)血清或低血清培養(yǎng))中,細(xì)胞常因營(yíng)養(yǎng)不足、滲透壓不穩(wěn)定或有害物質(zhì)影響出現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢、貼壁不良、存活率低等問題。本產(chǎn)品低內(nèi)毒素(符合實(shí)驗(yàn)級(jí)標(biāo)準(zhǔn))且無(wú)細(xì)胞毒性,添加到培養(yǎng)基中可提供營(yíng)養(yǎng)支持、維持滲透壓平衡,并通過載體作用運(yùn)輸脂肪酸等必需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),同時(shí)中和部分培養(yǎng)基中的毒性物質(zhì),改善細(xì)胞生長(zhǎng)微環(huán)境,提高細(xì)胞貼壁率與增殖活性。
3. 解決生物分子活性不穩(wěn)定問題
酶、抗體、蛋白樣品等生物分子在儲(chǔ)存或反應(yīng)過程中易因氧化、吸附、降解等因素失活,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。本產(chǎn)品可作為穩(wěn)定劑,通過與生物分子形成復(fù)合物、占據(jù)容器壁吸附位點(diǎn)、清除體系中的自由基等機(jī)制,保護(hù)生物分子的天然構(gòu)象與活性,延長(zhǎng)其保質(zhì)期,確保實(shí)驗(yàn)反應(yīng)的高效進(jìn)行。例如在PCR實(shí)驗(yàn)中,BSA可穩(wěn)定DNA聚合酶活性,解決因酶失活導(dǎo)致的擴(kuò)增效率低或無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物問題。
4. 解決實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差問題
實(shí)驗(yàn)材料的批次差異是導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性差的重要因素之一。本產(chǎn)品采用標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)工藝與嚴(yán)格的質(zhì)量控制體系,不同批次間的純度、活性、內(nèi)毒素含量等關(guān)鍵參數(shù)變異系數(shù)小,能有效保證實(shí)驗(yàn)條件的一致性。同時(shí),產(chǎn)品可全程溯源,每批均提供詳細(xì)的分析證書,便于實(shí)驗(yàn)者追蹤實(shí)驗(yàn)材料特性,減少因材料差異導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)誤差,提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性與可比性。
5. 解決難溶性物質(zhì)溶解與運(yùn)輸問題
在藥物研發(fā)、體外診斷等實(shí)驗(yàn)中,許多疏水性小分子物質(zhì)(如脂肪酸、部分藥物分子)在水溶液中溶解度低,難以形成穩(wěn)定的反應(yīng)體系,影響實(shí)驗(yàn)效果。本產(chǎn)品的載體作用可與這些疏水性物質(zhì)特異性結(jié)合,提高其在水溶液中的溶解性與分散性,同時(shí)實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)分子的有效運(yùn)輸,確保反應(yīng)體系的穩(wěn)定性與均一性,解決因物質(zhì)難溶導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)體系不均、反應(yīng)效率低等問題。
6. 解決蛋白定量標(biāo)準(zhǔn)品不準(zhǔn)確問題
蛋白定量實(shí)驗(yàn)(如Bradford法、Lowry法、BCA法)需要高純度、分子量穩(wěn)定的標(biāo)準(zhǔn)品來繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。本產(chǎn)品純度高、分子量均一(約66.5kDa),且不含干擾蛋白定量的雜質(zhì),作為標(biāo)準(zhǔn)品使用時(shí),能繪制出精準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,提高未知樣品蛋白濃度測(cè)定的準(zhǔn)確性,解決因標(biāo)準(zhǔn)品純度不足或分子量不均導(dǎo)致的定量結(jié)果偏差問題。
六、使用方法
1. 前期準(zhǔn)備
使用前需將產(chǎn)品從2-8℃儲(chǔ)存環(huán)境中取出,置于室溫下平衡30分鐘,避免因溫度驟變導(dǎo)致產(chǎn)品吸潮或溶解不夠。實(shí)驗(yàn)所需的水、緩沖液(如PBS、Tris-HCl)需提前滅菌并冷卻至室溫,所有實(shí)驗(yàn)器具(離心管、移液槍頭、燒杯等)需經(jīng)無(wú)菌處理,避免污染。
2. 溶解步驟
根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求計(jì)算所需產(chǎn)品用量,采用無(wú)菌操作稱取適量?jī)龈煞郏ńㄗh每次稱取不超過單次使用量,避免反復(fù)開蓋吸潮)。將稱取的凍干粉緩慢加入到預(yù)冷的無(wú)菌水或緩沖液中,建議初始溶解濃度為10-20mg/ml,輕柔顛倒容器混合,避免劇烈攪拌或震蕩(防止蛋白變性)。若溶解困難,可將容器置于20-37℃水浴中溫和振蕩10-15分鐘,促進(jìn)溶解,溶解過程中避免長(zhǎng)時(shí)間高溫放置。
3. 稀釋方法
溶解后的母液需根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景進(jìn)行稀釋,稀釋時(shí)應(yīng)使用與實(shí)驗(yàn)體系一致的緩沖液,避免因緩沖液不兼容導(dǎo)致蛋白沉淀。稀釋過程采用梯度稀釋法,逐步加入稀釋液并輕柔混合,確保稀釋均勻。稀釋后的工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用,若需短期保存,按儲(chǔ)存條件要求進(jìn)行處理。
4. 不同實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景的具體使用方法
(1)蛋白定量標(biāo)準(zhǔn)品使用
- 用無(wú)菌水將產(chǎn)品溶解為1mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)母液,分裝后-20℃冷凍保存。
- 實(shí)驗(yàn)時(shí)取出母液,用蛋白定量試劑盒配套緩沖液或PBS梯度稀釋為0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。
- 按照定量試劑盒操作說明,將標(biāo)準(zhǔn)溶液與檢測(cè)試劑混合,反應(yīng)后測(cè)定吸光度值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,用于未知樣品的蛋白濃度計(jì)算。
(2)ELISA實(shí)驗(yàn)封閉劑使用
- 封閉液配制:用PBS(pH7.2-7.4)或PBST(含0.05% Tween-20的PBS)溶解產(chǎn)品,制備1%-5%的BSA封閉液(常規(guī)濃度為3%),溶解后可通過0.45μm濾膜過濾除菌。
- 操作步驟:酶標(biāo)板包被抗原后,棄去包被液,用PBST洗滌3次,每次3分鐘;每孔加入200μl封閉液,37℃孵育1-2小時(shí)或4℃過夜;封閉結(jié)束后,棄去封閉液,PBST洗滌3次,即可進(jìn)行后續(xù)抗原抗體結(jié)合反應(yīng)。
(3)Western Blot實(shí)驗(yàn)封閉與抗體稀釋
- 封閉液配制:用TBST(含0.1% Tween-20的Tris-HCl緩沖液)溶解產(chǎn)品,制備3%-5%的封閉液。
- 封閉操作:轉(zhuǎn)膜完成后,將膜放入封閉液中,室溫?fù)u床孵育1小時(shí)或4℃過夜,確保膜浸沒;封閉后用TBST洗滌3次,每次5分鐘。
- 抗體稀釋:用含1% BSA的TBST將一抗、二抗稀釋至推薦濃度(根據(jù)抗體說明書調(diào)整),稀釋后的抗體溶液4℃可保存1-3天,避免反復(fù)凍融。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)添加劑使用
- 無(wú)血清培養(yǎng)基添加:用無(wú)菌水溶解產(chǎn)品后,通過0.22μm濾膜過濾除菌,按培養(yǎng)基體積的0.1%-1%比例加入培養(yǎng)基中,輕柔混合均勻。
- 常規(guī)培養(yǎng)基優(yōu)化:在含血清培養(yǎng)基中添加0.1%-0.5%的BSA,可提高細(xì)胞貼壁率與存活率,尤其適用于原代細(xì)胞或干細(xì)胞培養(yǎng)。
- 使用時(shí)機(jī):培養(yǎng)基配制完成后立即添加,避免培養(yǎng)基長(zhǎng)時(shí)間放置后添加導(dǎo)致污染;添加后的培養(yǎng)基4℃可保存1周,建議現(xiàn)配現(xiàn)用。
(5)PCR反應(yīng)體系穩(wěn)定使用
- 反應(yīng)體系中加入終濃度為0.1-0.5mg/ml的BSA(根據(jù)引物、模板特性調(diào)整濃度)。
- 操作步驟:按照PCR反應(yīng)體系配方依次加入緩沖液、dNTPs、引物、模板、Taq酶,最后加入稀釋好的BSA溶液,輕柔混勻后進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
- 適用場(chǎng)景:適用于模板中含有抑制物(如血紅蛋白、多糖)的PCR反應(yīng),可提高擴(kuò)增效率與特異性。
(6)蛋白樣品穩(wěn)定劑使用
- 蛋白儲(chǔ)存液添加:在蛋白樣品溶液中加入終濃度為1-5mg/ml的BSA,輕柔混合均勻。
- 抗體儲(chǔ)存:在抗體溶液中添加終濃度為2-5mg/ml的BSA,可延長(zhǎng)抗體在4℃或-20℃條件下的保質(zhì)期,維持其結(jié)合活性。
5. 操作注意事項(xiàng)
- 全程嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作規(guī)范,避免微生物污染,尤其是細(xì)胞培養(yǎng)和診斷試劑相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
- 溶解與稀釋過程中動(dòng)作要輕柔,避免劇烈攪拌、震蕩或反復(fù)吹打,防止蛋白變性失活。
- 避免在高溫(超過37℃)或強(qiáng)光環(huán)境下長(zhǎng)時(shí)間操作,溶解后的溶液需盡快使用或按要求儲(chǔ)存。
- 不同實(shí)驗(yàn)對(duì)BSA濃度要求不同,使用時(shí)建議進(jìn)行濃度梯度實(shí)驗(yàn),確定使用濃度。
- 若實(shí)驗(yàn)體系中含有高濃度鹽、洗滌劑或有機(jī)溶劑,需先優(yōu)化體系條件,避免這些物質(zhì)導(dǎo)致BSA沉淀。
七、常見問題與解決方案
1. 產(chǎn)品溶解困難或出現(xiàn)結(jié)塊
●問題描述
稱取的凍干粉加入溶劑后,長(zhǎng)時(shí)間不溶解或出現(xiàn)白色結(jié)塊,難以分散。
●解決方案
- 檢查溶劑是否合適,建議優(yōu)先使用無(wú)菌水或低離子強(qiáng)度緩沖液(如PBS)溶解,避免直接使用高濃度鹽溶液。
- 適當(dāng)提高溶解溫度,將容器置于20-37℃水浴中溫和振蕩10-15分鐘,促進(jìn)溶解,切勿高溫煮沸。
- 若仍有結(jié)塊,可將溶液通過無(wú)菌移液槍輕輕吹打結(jié)塊部位,或用無(wú)菌濾網(wǎng)過濾去除不溶物(僅適用于對(duì)純度要求不高的實(shí)驗(yàn))。
- 預(yù)防措施:溶解前將產(chǎn)品平衡至室溫,稱取時(shí)避免產(chǎn)品吸潮,溶解時(shí)按推薦濃度操作,不要超過20mg/ml。
2. 溶解后溶液出現(xiàn)渾濁或沉淀
●問題描述
產(chǎn)品溶解后溶液渾濁,或放置一段時(shí)間后出現(xiàn)白色沉淀。
●解決方案
- 檢查溶劑pH值,BSA在pH4.5-8.5范圍內(nèi)溶解性合適,若pH值偏離此范圍,需調(diào)整溶劑pH后重新溶解。
- 排查是否存在離子強(qiáng)度過高問題,高濃度鹽會(huì)導(dǎo)致BSA鹽析,需用低離子強(qiáng)度溶劑稀釋后使用。
- 若沉淀為蛋白變性導(dǎo)致,需重新稱取產(chǎn)品,嚴(yán)格按照溶解操作規(guī)范進(jìn)行溶解,避免劇烈攪拌或高溫。
- 儲(chǔ)存不當(dāng)也可能導(dǎo)致蛋白沉淀,確保產(chǎn)品儲(chǔ)存于2-8℃環(huán)境,避免反復(fù)凍融。
3. 免疫實(shí)驗(yàn)背景信號(hào)過高
●問題描述
ELISA或Western Blot實(shí)驗(yàn)中,空白對(duì)照或陰性對(duì)照出現(xiàn)高吸光度值或條帶,影響結(jié)果判斷。
●解決方案
- 檢查BSA純度,若使用過程中混入雜蛋白,可能導(dǎo)致非特異性結(jié)合,本產(chǎn)品純度不低于99%,若出現(xiàn)此類問題,可更換新批次產(chǎn)品。
- 調(diào)整封閉液濃度,適當(dāng)提高BSA濃度(如從3%提高至5%)或延長(zhǎng)封閉時(shí)間(如4℃過夜封閉)。
- 優(yōu)化洗滌步驟,增加洗滌次數(shù)(建議4-5次)或延長(zhǎng)洗滌時(shí)間,確保去除未結(jié)合的封閉劑和抗體。
- 檢查實(shí)驗(yàn)器具是否污染,酶標(biāo)板或膜是否有破損,更換合格的實(shí)驗(yàn)材料。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)中細(xì)胞生長(zhǎng)不良
●問題描述
添加BSA后,細(xì)胞出現(xiàn)貼壁率低、生長(zhǎng)緩慢、形態(tài)異常甚至死亡。
●解決方案
- 檢測(cè)BSA內(nèi)毒素含量,內(nèi)毒素過高會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞毒性,本產(chǎn)品內(nèi)毒素符合實(shí)驗(yàn)級(jí)標(biāo)準(zhǔn),若懷疑污染,可進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)或更換批次。
- 調(diào)整BSA添加濃度,濃度過高可能導(dǎo)致滲透壓異常,建議降低濃度至0.1%-0.5%,并重新配制培養(yǎng)基。
- 檢查培養(yǎng)基是否存在其他污染,或BSA與培養(yǎng)基成分是否兼容,可單獨(dú)配制含BSA的基礎(chǔ)培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)試。
- 確保BSA溶解后已過濾除菌,未除菌的BSA可能引入微生物污染,導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
5. 蛋白定量結(jié)果偏差較大
●問題描述
以BSA為標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性不佳,或未知樣品定量結(jié)果與預(yù)期偏差較大。
●解決方案
- 檢查標(biāo)準(zhǔn)品稀釋是否準(zhǔn)確,確保梯度稀釋過程中操作規(guī)范,避免稀釋誤差。
- 確認(rèn)檢測(cè)試劑與BSA的兼容性,不同定量方法(如Bradford法、Lowry法)對(duì)BSA的響應(yīng)不同,需選擇匹配的檢測(cè)試劑盒。
- 避免標(biāo)準(zhǔn)品溶液長(zhǎng)時(shí)間放置,稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液需在1小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè),防止BSA降解或構(gòu)象變化。
- 檢查實(shí)驗(yàn)儀器(如酶標(biāo)儀)是否校準(zhǔn),確保吸光度測(cè)定準(zhǔn)確。
6. 儲(chǔ)存后產(chǎn)品性能下降
●問題描述
產(chǎn)品儲(chǔ)存一段時(shí)間后,用于實(shí)驗(yàn)時(shí)效果不佳(如封閉效果變差、蛋白穩(wěn)定性下降)。
●解決方案
- 檢查儲(chǔ)存條件是否符合要求,確保產(chǎn)品始終儲(chǔ)存在2-8℃陰涼干燥環(huán)境,避免陽(yáng)光直射、高溫或潮濕。
- 若產(chǎn)品已開封,需盡快使用,開封后可分裝為小劑量,密封后置于-20℃冷凍儲(chǔ)存,減少反復(fù)開蓋吸潮。
- 溶解后的產(chǎn)品若反復(fù)凍融,會(huì)導(dǎo)致蛋白活性下降,需嚴(yán)格按照儲(chǔ)存要求分裝保存,避免反復(fù)凍融。
- 若產(chǎn)品已過保質(zhì)期,建議更換新批次產(chǎn)品,確保實(shí)驗(yàn)效果。
7. PCR反應(yīng)中擴(kuò)增效率低
●問題描述
添加BSA后,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物量少或無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物,與未添加時(shí)差異不大。
●解決方案
- 調(diào)整BSA終濃度,建議嘗試0.1-0.5mg/ml的濃度梯度,找到合適濃度,濃度過高可能抑制酶活性。
- 檢查BSA是否含有DNase污染,本產(chǎn)品無(wú)DNase污染,若懷疑污染,可進(jìn)行酶活性檢測(cè)或更換產(chǎn)品。
- 優(yōu)化PCR反應(yīng)條件,如退火溫度、引物濃度等,BSA僅能輔助穩(wěn)定酶活性,無(wú)法解決其他實(shí)驗(yàn)條件導(dǎo)致的擴(kuò)增效率問題。
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