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PhyNexus 蛋白質(zhì)G PhyTip柱說(shuō)明書(shū)

Protein G PhyTip Columns

蛋白質(zhì)G PhyTip柱

蛋白質(zhì)G PhyTip柱顯示功能性抗體（IgG）的高結(jié)合親和力和高選擇性親和純化。蛋白G柱顯示出對(duì)不同同種型和IgG種類(lèi)的高選擇性，并獲得高度濃縮的純化蛋白

• 高結(jié)合親和力
• 對(duì)不同物種的高選擇性和抗體的同種型
• IgG回收率為70-90％

使用我們專(zhuān)有的雙流式色譜法  提供的蛋白G提示可  提供完整的抗體結(jié)合和高終濃度。PhyTip色譜柱兼容大多數(shù)8,12和96通道自動(dòng)化液體處理機(jī)器人，包括  Agilent Technologies，  Beckman Coulter，  Dynamic Devices，  Perkin Elmer，  Hamilton和  Tecan。

含有蛋白G的PhyTip色譜柱

含有蛋白G的PhyTip色譜柱已經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可用于特定的PhyNexus試劑和儀器流速/體積，如下所示。使用PhyTip ME 1000和ME 200純化系統(tǒng)收集該信息

所有帶有蛋白G的PhyTip色譜柱都配有推薦的PhyTip緩沖液，包括：捕獲緩沖液 - 適用于需要添加額外緩沖液以補(bǔ)充樣品體積并確保正確捕獲pH值的情況。洗滌緩沖液I - 磷酸鹽緩沖溶液pH 7.4洗滌緩沖液II - 鹽水溶液。注意：沒(méi)有緩沖能力以確保有效洗脫富集緩沖液 - 用于終洗脫步驟 - 磷酸鹽緩沖溶液pH 2.5中和緩沖液。 - Tris緩沖溶液pH 9.0

注意：富集緩沖液以4 mL pH 2.5磷酸鹽緩沖溶液的形式提供，如果要純化的蛋白質(zhì)需要較少的酸性洗脫條件，例如pH 2.8，則可以如下更改富集緩沖液的pH值：取1 mL標(biāo)準(zhǔn)富集緩沖液（pH值） 2.5）加入30μL1MTris Buffer標(biāo)準(zhǔn)中和緩沖液，得到1 mL pH 2.8洗脫緩沖液（實(shí)際pH值可能因體積精度而異）對(duì)于pH 3.0濃縮緩沖液，取1 mL標(biāo)準(zhǔn)富集緩沖液（pH 2.5） ）加入40μL1MTris Buffer標(biāo)準(zhǔn)中和緩沖液，得到1 mL pH 3.0洗脫緩沖液（實(shí)際pH值可能因體積精度而異）

對(duì)于中和步驟，添加25％v / v的洗脫體積，例如，如果洗脫體積為20μL，則添加5μL的1M Tris中和緩沖液

含有蛋白G樹(shù)脂的200多個(gè)PhyTip色譜柱：

對(duì)于含有1mg BSA的5μgIgG2a（抗FITC MAb。）的200μL樣品，使用下面顯示的條件處理，在終樣品體積中回收大于40％的原始IgG質(zhì)量。此外，通過(guò)用考馬斯檢測(cè)的SDS-PAGE測(cè)定，回收的IgG純度超過(guò)95％。

捕獲：通過(guò)樹(shù)脂床以250μL/分鐘的流速通過(guò)樹(shù)脂床捕獲200μL樣品。

純化：200μLPhyNexusProtein G洗滌緩沖液I，以500μL/ min的流速通過(guò)樹(shù)脂床兩個(gè)循環(huán)，然后用洗滌緩沖液II進(jìn)行第二次洗滌，在樹(shù)脂床上通過(guò)兩個(gè)循環(huán)流動(dòng)速率為500μL/ min。

富集：用10μLPhyNexusProtein G Enrichment Buffer將蛋白質(zhì)洗脫到溶液中，以500μL/ min的流速通過(guò)樹(shù)脂床5個(gè)循環(huán)。用3μLPhyNexus蛋白G中和緩沖液中和。

出廠時(shí)含有的蛋白G富集緩沖液含有：111mM NaH2PO4,140mM NaCl，14.8mM H3PO4，pH3.0

含有蛋白G樹(shù)脂的1000多種PhyTip色譜柱：

對(duì)于含有5μgBSA的10μgIgG2a（抗FITC MAb。）的500μL樣品，使用下面顯示的條件處理，在終樣品體積中回收大于40％的原始IgG質(zhì)量。此外，通過(guò)用考馬斯檢測(cè)的SDS-PAGE測(cè)定，回收的IgG純度超過(guò)95％。

捕獲：通過(guò)樹(shù)脂床以250μL/分鐘的流速通過(guò)四個(gè)循環(huán)捕獲500μL樣品。

純化：1000μLPhyNexusProtein G洗滌緩沖液I，以500μL/ min的流速通過(guò)樹(shù)脂床兩個(gè)循環(huán)，然后用洗滌緩沖液II進(jìn)行第二次洗滌，以500的流速通過(guò)樹(shù)脂床兩個(gè)循環(huán)。 μL/分鐘。

富集：用15mL PhyNexus Protein G Enrichment Buffer將蛋白質(zhì)洗脫到溶液中，以500μL/ min的流速通過(guò)樹(shù)脂床5個(gè)循環(huán)。用5μLPhyNexus蛋白G中和緩沖液中和。

PhyTip色譜柱是PhyNexus*的捕獲，純化和富集TM工具，專(zhuān)為微量蛋白質(zhì)樣品制備而設(shè)計(jì)。PhyTip色譜柱適用于各種液體處理平臺(tái)，并含有特定的親和樹(shù)脂，可滿足特定應(yīng)用要求。

PhyNexus建議使用含有IgG的PhyTip入門(mén)試劑盒作為標(biāo)準(zhǔn)，以驗(yàn)證所有應(yīng)用中PhyTip色譜柱的使用。

用于純化和富集的樣品必須清澈且無(wú)顆粒物質(zhì)。在與PhyTip色譜柱一起使用之前，強(qiáng)烈建議離心樣品并僅使用澄清的上清液。

運(yùn)輸和存儲(chǔ)

每包PhyTip色譜柱均按照高標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)和質(zhì)量控制，并在保留盒中運(yùn)輸，以保持每個(gè)PhyTip色譜柱中特定親和樹(shù)脂的完整性。本產(chǎn)品在環(huán)境溫度下運(yùn)輸，但收到后應(yīng)存放在4到8℃的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室冰箱中。

• 不要冷凍或儲(chǔ)存冷凍。
• 不使用時(shí)，請(qǐng)將盒蓋關(guān)閉并密封，存放在冰箱中。
• 在干燥環(huán)境中長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存??，不要讓親和樹(shù)脂干燥。

含有蛋白G的PhyTip色譜柱在從PhyNexus發(fā)貨時(shí)儲(chǔ)存在甘油中。

Protein G PhyTip色譜柱可用于這些機(jī)器人系統(tǒng)。